• Добавить в закладки
  • Facebook
  • Twitter
  • Telegram
  • VK
  • Печать
  • Email
  • Скопировать ссылку
28.10.2016, 07:42
Редакция Naked Science
610

Биологи научились люминесценции нейронных ансамблей

Американские ученые разработали биолюминесцентный сенсор для анализа нейронной активности методом оптогенетики. В отличие от флуоресцентных аналогов новый сенсор позволяет следить за активностью целых нейронных ансамблей и не зависит от внешних источников освещения.

9db3a936903779
©Wikipedia / Автор: Михаил Григорьев

Оптогенетика — метод изучения работы клеток (часто нейронов) путем введения в их мембрану свет-чувствительных рецепторов. В сценарии подавления на рецептор (каналродопсин) воздействуют синим лазером, что открывает доступ притоку в клетку ионов натрия. Затем на связанный с рецептором белок (он вводится внутрь нейрона) направляют зеленый лазер и тот подсвечивает клетки, которые экспрессируют рецептор. Для активации используют рецептор меланопсин — вместо ионов натрия он открывает доступ ионам кальция, накопление которых вызывает возбуждение нейрона. Таким образом ученые могут активировать или подавлять клетки мозга, наблюдая за эффектами.

 

В сравнении с классической электростимуляцией оптогенетика позволяет манипулировать отдельными нейронами и проводить тонкую настройку нейронных связей. Потенциально процедура также может осуществляться неинвазивно — без имплантирования в клетку подсвечивающего белка. Однако современные инструменты оптогенетики основаны на явлении флуоресценции, что ограничивает применение метода. Так, активация флуоресцентного белка требует постоянного воздействия светом — это может приводить к феномену автофлуоресценции, когда испускать свет начинают другие, не задействованные в эксперименте клетки. Кроме того, такие зонды не позволяют изучать крупные нейронные комплексы.

 

В качестве альтернативы ученые из Университета Вандербильта разработали биолюминесцентный сенсор CalfluxVTN на основе синтетической люциферазы NanoLuc. Этот фермент был синтезирован ранее при изучении черноглазой креветки (Oplophorus gracilirostris) и отличается повышенной интенсивностью свечения. Для исследования люцифераза была генетически отредактирована таким образом, чтобы ее активация вызывалась ионами кальция, при этом повторного воздействия лазером для активации не требовалось. Фермент подсвечивает клетку в ответ на само возбуждение нейрона — приток ионов кальция.

 

На первом этапе сенсор тестировался на культуре клеток из почек человека. Затем, для проверки рабочего диапазона клеток, которые сенсор может подсвечивать, он имплантировался в нейроны гиппокампа мышей, зараженные аденоассоциированным вирусом. Активация люциферазы (после воздействия светом на рецептор) вызывалась добавлением тапсигаргина и гистамина, а в случае нейронов — всплеском ионов калия, который выступал побочным эффектом деполяризации их мембраны.

 

Биологи научились люминесценции нейронных ансамблей – иллюстрация к материалу на Naked Science

Сравнение максимальной интенсивности свечения CalfluxVTN и Nano-lantern / © Jie Yang et al.

 

Результаты показали, что яркость нового сенсора в 30–50 раз превышает аналог — Nano-lantern и в 100–150 раз — показатели других люминесцентных сенсоров. При этом интенсивность люминесценции напрямую зависела от уровня стимуляции свет-чувствительного рецептора. Благодаря генетическому редактированию новый датчик оказался высокоспецифичен и был невосприимчив к другим элементам деполяризации — ионам натрия, калия, магния. Испытания на нейронах подтвердили, что сенсор может использоваться на больших группах клеток: в эксперименте авторам удалось применить его к 10 процентам популяции гиппокампальных нейронов.

 

По словам ученых, технология может стать альтернативой флуоресцентным зондам. Следующим шагом станет оценка чувствительности сенсора на отдельных клетках. Признаки такой чувствительности прослеживаются, отметили авторы.

 

Статья опубликована в журнале Nature Communications.

 

Биологи научились люминесценции нейронных ансамблей – иллюстрация к материалу на Naked Science

Каталитическая реакция люциферазы NanoLuc в ответ на добавление тапсигаргина в клетки печени / © Jie Yang et al.

Нашли опечатку? Выделите фрагмент и нажмите Ctrl + Enter.
Подписывайтесь на нас в Telegram, Яндекс.Новостях и VK
Предстоящие мероприятия
8 сентября, 20:06
Evgenia Vavilova

Ученые впервые смогли создать видимый в оптическом диапазоне темпоральный кристалл. Для этого они использовали жидкие кристаллы.

6 сентября, 16:25
Evgenia Vavilova

Для разрыва связи между атомами водорода понадобились золото, титан и ультрафиолетовое излучение. Полученный водород ученые использовали для преобразования углекислого газа в этилен.

6 сентября, 11:48
Игорь Байдов

В данных космического телескопа «Джеймса Уэбба» ученые обнаружили объект, который может оказаться галактикой, сформировавшейся всего через 90 миллионов лет после Большого взрыва. Если открытие подтвердится, она станет абсолютным рекордсменом, побив рекорд предыдущего чемпиона почти на 200 миллионов лет. Однако исследователи осторожны — загадочный сигнал может иметь и другое, не менее интересное объяснение.

6 сентября, 16:25
Evgenia Vavilova

Для разрыва связи между атомами водорода понадобились золото, титан и ультрафиолетовое излучение. Полученный водород ученые использовали для преобразования углекислого газа в этилен.

4 сентября, 13:59
Андрей П.

Глубоководная жизнь нам, сухопутным, кажется инопланетной. В недавней экспедиции морские биологи погрузились на дно пятого по глубине Курило-Камчатского желоба. Они преодолели 9500 метров толщи воды и встретили удивительно богатые сообщества организмов, живущих благодаря хемосинтезу. Тысячи километров дна покрывает беспозвоночная жизнь, которая питается благодаря бактериям, окисляющим метан. Naked Science поговорил с одним из авторов исследования.

6 сентября, 11:48
Игорь Байдов

В данных космического телескопа «Джеймса Уэбба» ученые обнаружили объект, который может оказаться галактикой, сформировавшейся всего через 90 миллионов лет после Большого взрыва. Если открытие подтвердится, она станет абсолютным рекордсменом, побив рекорд предыдущего чемпиона почти на 200 миллионов лет. Однако исследователи осторожны — загадочный сигнал может иметь и другое, не менее интересное объяснение.

3 сентября, 07:56
Адель Романова

Недавнее появление в Солнечной системе межзвездного объекта 3I/ATLAS вызвало новую волну обсуждения вопроса о том, как отличить комету или астероид от внеземного космического корабля либо другого артефакта, не созданного человечеством. Астрономы рассказали, что у искусственного объекта могут быть четыре характерные особенности.

12 августа, 11:29
Юлия Трепалина

Влияет ли формат знакомства на качество последующих романтических отношений в паре? Научные данные на этот счет разнятся. Новое исследование по вопросу представила группа психологов из Польши, Австралии и Великобритании. В попытке понять, при каком сценарии удовлетворенность отношениями выше, а любовь крепче — когда двое нашли друг друга в Сети или познакомились в жизни, — ученые опросили свыше 6000 тысяч человек из разных стран.

4 сентября, 13:59
Андрей П.

Глубоководная жизнь нам, сухопутным, кажется инопланетной. В недавней экспедиции морские биологи погрузились на дно пятого по глубине Курило-Камчатского желоба. Они преодолели 9500 метров толщи воды и встретили удивительно богатые сообщества организмов, живущих благодаря хемосинтезу. Тысячи километров дна покрывает беспозвоночная жизнь, которая питается благодаря бактериям, окисляющим метан. Naked Science поговорил с одним из авторов исследования.

[miniorange_social_login]

Комментарии

Написать комментарий
Подтвердить?
Подтвердить?
Причина отклонения
Подтвердить?
Не получилось опубликовать!

Вы попытались написать запрещенную фразу или вас забанили за частые нарушения.

Понятно
Жалоба отправлена

Мы обязательно проверим комментарий и
при необходимости примем меры.

Спасибо
Аккаунт заблокирован!

Из-за нарушений правил сайта на ваш аккаунт были наложены ограничения. Если это ошибка, напишите нам.

Понятно
Что-то пошло не так!

Наши фильтры обнаружили в ваших действиях признаки накрутки. Отдохните немного и вернитесь к нам позже.

Понятно
Лучшие материалы
Закрыть
Войти
Регистрируясь, вы соглашаетесь с правилами использования сайта и даете согласие на обработку персональных данных.
Ваша заявка получена

Мы скоро изучим заявку и свяжемся с Вами по указанной почте в случае положительного исхода. Спасибо за интерес к проекту.

Понятно