• Добавить в закладки
  • Facebook
  • Twitter
  • Telegram
  • VK
  • Печать
  • Email
  • Скопировать ссылку
28.10.2016
Редакция Naked Science
544

Биологи научились люминесценции нейронных ансамблей

Американские ученые разработали биолюминесцентный сенсор для анализа нейронной активности методом оптогенетики. В отличие от флуоресцентных аналогов новый сенсор позволяет следить за активностью целых нейронных ансамблей и не зависит от внешних источников освещения.

9db3a936903779
©Wikipedia

Оптогенетика — метод изучения работы клеток (часто нейронов) путем введения в их мембрану свет-чувствительных рецепторов. В сценарии подавления на рецептор (каналродопсин) воздействуют синим лазером, что открывает доступ притоку в клетку ионов натрия. Затем на связанный с рецептором белок (он вводится внутрь нейрона) направляют зеленый лазер и тот подсвечивает клетки, которые экспрессируют рецептор. Для активации используют рецептор меланопсин — вместо ионов натрия он открывает доступ ионам кальция, накопление которых вызывает возбуждение нейрона. Таким образом ученые могут активировать или подавлять клетки мозга, наблюдая за эффектами.

 

В сравнении с классической электростимуляцией оптогенетика позволяет манипулировать отдельными нейронами и проводить тонкую настройку нейронных связей. Потенциально процедура также может осуществляться неинвазивно — без имплантирования в клетку подсвечивающего белка. Однако современные инструменты оптогенетики основаны на явлении флуоресценции, что ограничивает применение метода. Так, активация флуоресцентного белка требует постоянного воздействия светом — это может приводить к феномену автофлуоресценции, когда испускать свет начинают другие, не задействованные в эксперименте клетки. Кроме того, такие зонды не позволяют изучать крупные нейронные комплексы.

 

В качестве альтернативы ученые из Университета Вандербильта разработали биолюминесцентный сенсор CalfluxVTN на основе синтетической люциферазы NanoLuc. Этот фермент был синтезирован ранее при изучении черноглазой креветки (Oplophorus gracilirostris) и отличается повышенной интенсивностью свечения. Для исследования люцифераза была генетически отредактирована таким образом, чтобы ее активация вызывалась ионами кальция, при этом повторного воздействия лазером для активации не требовалось. Фермент подсвечивает клетку в ответ на само возбуждение нейрона — приток ионов кальция.

 

На первом этапе сенсор тестировался на культуре клеток из почек человека. Затем, для проверки рабочего диапазона клеток, которые сенсор может подсвечивать, он имплантировался в нейроны гиппокампа мышей, зараженные аденоассоциированным вирусом. Активация люциферазы (после воздействия светом на рецептор) вызывалась добавлением тапсигаргина и гистамина, а в случае нейронов — всплеском ионов калия, который выступал побочным эффектом деполяризации их мембраны.

 

Сравнение максимальной интенсивности свечения CalfluxVTN и Nano-lantern / © Jie Yang et al.

 

Результаты показали, что яркость нового сенсора в 30–50 раз превышает аналог — Nano-lantern и в 100–150 раз — показатели других люминесцентных сенсоров. При этом интенсивность люминесценции напрямую зависела от уровня стимуляции свет-чувствительного рецептора. Благодаря генетическому редактированию новый датчик оказался высокоспецифичен и был невосприимчив к другим элементам деполяризации — ионам натрия, калия, магния. Испытания на нейронах подтвердили, что сенсор может использоваться на больших группах клеток: в эксперименте авторам удалось применить его к 10 процентам популяции гиппокампальных нейронов.

 

По словам ученых, технология может стать альтернативой флуоресцентным зондам. Следующим шагом станет оценка чувствительности сенсора на отдельных клетках. Признаки такой чувствительности прослеживаются, отметили авторы.

 

Статья опубликована в журнале Nature Communications.

 

Каталитическая реакция люциферазы NanoLuc в ответ на добавление тапсигаргина в клетки печени / © Jie Yang et al.

Нашли опечатку? Выделите фрагмент и нажмите Ctrl + Enter.
Подписывайтесь на нас в Telegram, Яндекс.Новостях и VK
Вчера, 13:02
Дарья Губина

Ученые проанализировали содержание тяжелых элементов в современных звездах и нашли новые закономерности, которые пока можно объяснить лишь распадом еще более тяжелых элементов. Из этого следует, что древние звезды синтезировали необычайно тяжелые элементы — намного тяжелее, чем любые, обнаруженные в земной природе.

Вчера, 11:43
Александр Березин

В России в рамках комплексной программы развития атомной науки, техники и технологий активно строят МБИР — Многоцелевой научно-исследовательский реактор четвертого поколения на быстрых нейтронах. Это первый в своем роде научно-исследовательский реактор в мировой практике. Почему и за счет чего именно он стал таким?

Позавчера, 11:27
Александр Березин

На проходящей в Шанхае выставке Marintec China 2023 государственная китайская верфь заявила о намерении построить самый большой в мире атомный контейнеровоз (на 24 тысячи стандартных контейнеров). Необычной чертой 400-метрового гиганта должен стать реактор такого типа, который до сих пор никому не удавалось заставить работать штатно.

6 декабря
Алиса Гаджиева

Авторы нового исследования рассказали, каким образом древние люди доставляли многотонные камни к месту строительства крупнейшего в Европе мегалитического сооружения.

5 декабря
Дарья Губина

Впервые вблизи сверхмассивной черной дыры в центре Млечного Пути обнаружили звезду из другой галактики. По данным наблюдений за восемь лет ученые смогли определить состав, скорость и другие параметры этого объекта.

Позавчера, 11:27
Александр Березин

На проходящей в Шанхае выставке Marintec China 2023 государственная китайская верфь заявила о намерении построить самый большой в мире атомный контейнеровоз (на 24 тысячи стандартных контейнеров). Необычной чертой 400-метрового гиганта должен стать реактор такого типа, который до сих пор никому не удавалось заставить работать штатно.

15 ноября
Александр Березин

Парниковый эффект от американского природного газа, поставляемого в Старый Свет, неожиданно оказался выше, чем от сжигания местного угля. И намного выше, чем от российского газа.

1 декабря
Александр Березин

Судно Yara Eyde станет первым, плавающим только на этом виде топлива, что потребует существенных модификаций судового двигателя. Его токсичность настолько высока, что предельно допустимая концентрация подобного горючего в 15 раз ниже, чем у солярки, применяемой в контейнеровозах сегодня. Производитель решился на столь непростой шаг ради экологии.

10 ноября
Михаил Орлов

Известно всего несколько примеров злокачественных опухолей, которые ведут себя подобно инфекции — передаются другим организмам. Среди них — трансмиссивный рак двустворчатых моллюсков BTN. Авторы новой статьи описали географические и экологические аспекты распространения BTN среди мидий в Баренцевом море, оценили число больных моллюсков и узнали, как расселение «заразного рака» связано с Северным морским путем.

[miniorange_social_login]

Комментарии

Написать комментарий

Подтвердить?
Подтвердить?
Не получилось опубликовать!

Вы попытались написать запрещенную фразу или вас забанили за частые нарушения.

Понятно
Жалоба отправлена

Мы обязательно проверим комментарий и
при необходимости примем меры.

Спасибо
Аккаунт заблокирован!

Из-за нарушений правил сайта на ваш аккаунт были наложены ограничения. Если это ошибка, напишите нам.

Понятно
Что-то пошло не так!

Наши фильтры обнаружили в ваших действиях признаки накрутки. Отдохните немного и вернитесь к нам позже.

Понятно
Лучшие материалы
Войти
Регистрируясь, вы соглашаетесь с правилами использования сайта и даете согласие на обработку персональных данных.
Ваша заявка получена

Мы скоро изучим заявку и свяжемся с Вами по указанной почте в случае положительного исхода. Спасибо за интерес к проекту.

Понятно
Ваше сообщение получено

Мы скоро прочитаем его и свяжемся с Вами по указанной почте. Спасибо за интерес к проекту.

Понятно

Сообщить об опечатке

Текст, который будет отправлен нашим редакторам: